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細胞免疫熒光的具體實驗步驟介紹

釋出時間▩•·▩:2022-09-08 00:00:00       點選次數▩•·▩:1642

  細胞免疫熒光主要用於蛋白定位研究和細胞內訊號轉導│↟,細胞免疫熒光技術是利用免疫技術和熒游標記技術相結合│↟,原理就是利用抗原-抗體反應之後│↟,採用熒游標記│↟,標記完成後│↟,顯微鏡下觀察細胞內某種抗原成分的多少│↟,從而做出一個定位研究│↟,也可以為細胞內訊號傳導提供一個明確的指導│↟,細胞免疫熒光具有敏感性強✘₪✘✘、特異性高✘₪✘✘、速度快的特點│↟,是目前比較常用的組織學技術│↟,也是比較精確的◕·。
  細胞免疫熒光實驗步驟▩•·▩:
  首日▩•·▩:
  1.在培養板中將已爬好細胞的玻片用PBS浸洗3次│↟,每次3min;
  2.用4%的多聚甲醛固定爬片15min│↟,PBS浸洗玻片3次│↟,每次3min;
  3.0.5%TritonX-100(PBS配製)室溫通透20min(細胞膜上表達的抗原省略此步驟);
  4.PBS浸洗玻片3次│↟,每次3min│↟,吸水紙吸乾PBS│↟,在玻片上滴加正常山羊血清│↟,室溫封閉30min;
  5.吸水紙吸掉封閉液│↟,不洗│↟,每張玻片滴加足夠量的稀釋好的一抗並放入溼盒│↟,4℃孵育過夜;
  次日▩•·▩:
  6.加熒光二抗▩•·▩:PBST浸洗爬片3次│↟,每次3min│↟,吸水紙吸乾爬片上多餘液體後滴加稀釋好的熒光二抗│↟,溼盒中20-37℃孵育1h│↟,PBST浸洗切片3次│↟,每次3min;注意▩•·▩:從加熒光二抗起│↟,後面所有操作步驟都儘量在較暗處進行◕·。
  7.復染核▩•·▩:滴加DAPI避光孵育5min│↟,對標本進行染核│↟,PBST5minx4次洗去多餘的DAPI;8.用吸水紙吸乾爬片上的液體│↟,用含抗熒光淬滅劑的封片液封片│↟,然後在熒光顯微鏡下觀察採集影象◕·。

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