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透射電鏡實驗技術簡要介紹

釋出時間₪☁₪◕•:2022-09-08 00:00:00       點選次數₪☁₪◕•:1889

  透射電鏡實驗技術簡要介紹
  樣本製備方法₪☁₪◕•:
  由於電鏡電子束穿透能力的限制╃☁✘✘☁,必須把標本切成厚度小於0.1um以下的薄片才適用╃☁✘✘☁,這種薄片稱為超薄切片✘✘·。常用的超薄切片厚度是50-70nm✘✘·。
  在透射電鏡的樣品製備方法中╃☁✘✘☁,超薄切片技術是最基本•₪•·、最常用的製備技術✘✘·。超薄切片的製作過程基本上和石蠟切片相似╃☁✘✘☁,需要經過取材•₪•·、固定•₪•·、脫水•₪•·、浸透•₪•·、包埋聚合•₪•·、切片及染色等步驟✘✘·。
  一取材的基本要求
  組織從生物活體取下以後╃☁✘✘☁,如果不立即進行適當處理╃☁✘✘☁,會由於細胞內部各種酶的作用╃☁✘✘☁,出現細胞自溶現象✘✘·。此外╃☁✘✘☁,還可能由於汙染╃☁✘✘☁,微生物在組織內繁殖使細胞的微細結構遭受破壞✘✘·。因此╃☁✘✘☁,為了使細胞結構儘可能保持生前狀態╃☁✘✘☁,必須做到快•₪•·、小•₪•·、準•₪•·、冷₪☁₪◕•:
  (1).動作迅速╃☁✘✘☁,組織從活體取下後應在最短時間內(爭取在1分鐘內)投入2.5%戊二醛固定液✘✘·。
  (2).所取組織的體積要小╃☁✘✘☁,一般不超過1mm×1mm×1mm✘✘·。也可將組織修成1mm×1mm×2mm大小長條形✘✘·。因為固定劑的滲透能力較弱╃☁✘✘☁,組織塊如果太大╃☁✘✘☁,塊的內部將不能得到良好的固定✘✘·。
  (3).機械損傷要小╃☁✘✘☁,解剖器械應鋒利╃☁✘✘☁,操作宜輕╃☁✘✘☁,避免牽拉•₪•·、挫傷與擠壓✘✘·。
  (4).操作最好在低溫(0℃~4℃)下進行╃☁✘✘☁,以降低酶的活性╃☁✘✘☁,防止細胞自溶✘✘·。
  (5).取材部位要準確✘✘·。
  取材方法₪☁₪◕•:將取出的組織放在潔淨的蠟版上╃☁✘✘☁,滴一滴預冷的固定液╃☁✘✘☁,用兩片新的•₪•·、鋒利的刀片成“拉鋸式”將組織切下並修小╃☁✘✘☁,然後用牙籤或鑷子將組織塊移至盛有冷的固定液的小瓶中✘✘·。如果組織帶有較多的血液和組織液╃☁✘✘☁,應先用固定液洗幾遍╃☁✘✘☁,然後再切成小塊固定✘✘·。

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